膜蛋白和脂質(zhì)體組成生物膜,生物膜對(duì)生命起 著重要的作用。為了弄清膜蛋白在組成生物膜中所 起的作用及功能,了解膜蛋白的結(jié)構(gòu)非常重要。 

膜蛋白通常只溶解在膠束溶液中,因此表征脂 質(zhì)體溶劑中低聚態(tài)的膜蛋白相當(dāng)困難。本文利用多 角度激光光散射儀（MALS）、紫外檢測(cè)器（UV）與 示差折光檢測(cè)器（DRI）聯(lián)用技術(shù)測(cè)定蛋白核、脂 質(zhì)體膠束、蛋白-脂質(zhì)體復(fù)合物分子量以及各組分的 含量。

圖 1 是膜蛋白經(jīng) SEC 色譜柱分離后的色譜圖。 其測(cè)定系統(tǒng)組成為:DAWN MALS多角度激光光散 射儀、（280nm）紫外檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器。

為了保持溶液狀態(tài)的膜蛋白,必須使含有脂質(zhì) 體膜蛋白在流動(dòng)相中的濃度比其臨界膠束濃度高。 因?yàn)槟さ鞍?/span>-脂質(zhì)體配合物具有與標(biāo)準(zhǔn)球蛋白非常 不同的構(gòu)型,所以它們對(duì)色譜柱填料也有非常不同 的吸附特性以及洗脫特征曲線。因此,采用傳統(tǒng)的 色譜柱校準(zhǔn)法依據(jù)洗脫時(shí)間來(lái)確定膜蛋白的分子量 所得數(shù)據(jù)可信度極大降低。

而采用 MALS、UV 和 DRI 聯(lián)用技術(shù)可測(cè)得膜蛋 白核、脂質(zhì)體膠束及蛋白-脂質(zhì)體復(fù)合物的分子量。 如圖 2 所示。此圖表明蛋白-脂質(zhì)體復(fù)合物中的膜蛋 白是以單體狀態(tài)存在（分子量為 62kDa）。

本實(shí)驗(yàn)清晰的表明 MALS、UV 和 DRI 聯(lián)用技術(shù) 是一種*的、功能強(qiáng)大的表征膜蛋白的手段;不 僅如此,該方法同樣適用于表征蛋白類修飾復(fù)合物, 如:聚乙二醇 PEG 蛋白、糖基化蛋白等。

圖 1:表示膜蛋白的 MALS（上）、UV（中）以及 DRI（下）的色譜圖信號(hào)

光散射法用于膜蛋白結(jié)構(gòu)研究 

This note graciously submitted by David Veesler, Architecture et Fonction des Macromolécules Biologiques, Unité Mixte de Rech- erches UMR6098, CNRS, de Provence Université de la Méditerranée, Marseille France.

DAWN®, ASTRA®, OPTILAB®, and the Wyatt Technology logo are registered trademarks of Wyatt Technology Corporation. © 2009 wyatt technology corporation 9/24/09